CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO industrial y de servicios No 199
Marisol Sebastián Rendón
Laboratorista Clínico
4 "DM"
Practica No 2
Preparación y esterilización de materiales y de medios de cultivo
Procesar cultivos bacteriológicos
Objetivo:
saber cuales son las principales técnicas de esterilización de los materiales de vidrio y aprender a preparar medios de cultivo, saber que cada medio es para cada bacteria u hongo y tambien que para preparar un cultivo debemos de tener esterilizado nuestro material que vamos a utilizar para que evitar contaminaciones insesarias
Introducción:
Los microorganismos, como todos los otros seres vivos, son verdaderamente susceptibles a los cambios de las condiciones ambientales y en la medida en que se han podido adaptar a estos cambios, se han distribuido en una gran diversidad de hábitats incluyendo los de condiciones extremas de tipo físico y químico.
La esterilización es la destrucción total de todos los microorganismos tomando encuenta las formas vegetativas y las esporas y para lograr esto existen varios medios como son la acción de los agentes químicos y físicos
Los principales métodos de esterilización que se emplean mas comunmente en un laboratorio es el calor húmedo, seco y filtración de estos el mas recomendable es el la tecnica de autoclave
Un medio de cultivo consiste en un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir bajo condiciones favorables de pH y temperatura el crecimiento de virus, microorganismos, células o incluso pequeñas plantas. Según qué se quiera hacer crecer, el medio requerirá unas u otras condiciones. Generalmente se presentan en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido.
Material:
- portaobjetos
- matraz
- mechero de bunsen
- olla expres
- gasas
- algodón
- cinta testigo
- papel estraza
-piseta
- cuba
- asa de platino
- tripie
- caja petri
Reactivos:
- agar ss salmonella shigella
- agar EMB
- muestra bilogica: heces y orina
- fenol
. colorantes gram
- aceite de inmersión
Procedimeinto:
1) Lavar perfectamente dos matraces con escobillon y detargente y enjaguar con abundante agua corriente
2) dejar secar
3) despues se procede a pesar en una balanza granataria los dos agres (SS y EMB) para 40 ml de agua, se peso de agar SS 2.9 gr y para el agar de EMB se peso 1.49
4) realizar un tapon con la ayuda del algodon y la gasa y tambien hacer un gorrito con el papel estraza para la boca del matraz
5) despues colocar en un matrz 40 ml de agua destilada
6) despues se agrega el agar al matraz, pero antes debe estar desinfectada la zona donde se va a trabajar , se enciende el mechero y el matrz se coloca en el tripie que tiene la tela de abesto, se deja hervir por un min
7) despues se retira el matrz y se le coloca el tapon antes flamearlo, se deja enfriar un poco y se prosigue para llenar las cajas petri 3/4 partes y se espera a que gelen junto al mechero de bunsen
8) se hace el mismo procedimiento para el agar EMB pero este se va esterilizar en autoclave para ello se le coloca el tapon y el gorrito hecho de papel de estraza con la cinta testigo y se coloca en la olla
9) se va a verter 1/3 parte de agua en la olla expres
10) colocar la base de esta y poner los mecheros de fisher
11) acomodar los medios de cultivo y los materiales
12) cerrarla y esperar a que la temperatura suba
13) dejar que se caliente hasta los 121 grados centigrados y mantener asi por 15 min
14) despues se sacan los matraces y se dejan enfriar un poco, luego se coloca la solución en las cajas petri hasta la mitad igual cerca del mechero hasta gelen
15) luego se prosigue a sembrar las muestras bilogicas de heces y orina para ello se flamea la aza de platino y se toma un poco de las muestra y se siembra en tres tiempos, esto se hace igual con la orina y las heces simepre frente al mechero
16) despues se dejan encubar en la estufa de incubación
Preparación de frotis:
1) ya despues que transcurrio tiempo se sacan los medios de cultivo y se observan sus colonias macroscopicamente y microscopicamente
.
.2) se lavan los portaobejtos y se dejan secar
3) se limpia perfectamnete la zona donde se va atrabajar
4) se flamea la aza hasta que este al rojo vivo , se toma un poco de las colnias y se coloca en medio del portaobjetos que tiene un gota de agua destilada
5) fijar el frotis y teñirlo con la tinción de gram
Observaciones:
Agar salmonella shigella
Aqui se colo orina y podemos observar colonias que tiene una forma puntifotrme con un borde liso y con una elevación plana
Agar EMB ( con muestra de heces)
Aqui podemos onservar colonias de forma puntiforme, con un borde liso y una elevación plana de color violeta y verde brillante por lo que estas colonias prsentan caracteriastiacas de E.coli
frotis de agar SS con muestra de orina con el objetivo 100X
se observan bacilos gram negativos aunque no se aprecia bien en la imagen
frotis de medio EMB con muestra de heces con el objetivo 100X
se observan bacilos gram negativos agrupados en palizadas
Conclusión:
Esta practica ya la habiamos realizado anteriormente en otra materia pero nos sirvio para reforzar nuestros conocimientos que ya teniamos anterioremente y tambien nos ayudo arecordar que la esterilizacion es la eliminación total de los todos los microorganismos incluyendo las esporas y que hay diversas tecnicas para esterilizar una de ellas es la autoclave que se utiliza mas en los laboratorios y es la que nosostros siempre utilizamos en la escuela, que es necesario tener bien esterilizado todos nuestros materiales para prepara medios de cultivos y evitar su contaminacion con otros agentes ya que puede alterar los resulatdos del paciente, tambien recoradmos que un medio de cultivo es es una preparación artificial que tiene los nutrientes necesarios para que haya un crecimeinto de microorganismos que nos sirven de gran ayuda para poder identificar la morfología de las bacterias observando sus caracteristicas macroscopicas por medio de sus colonias que se originan y tambien sus caracteristicas microscopicas realizando un frotis y despues hacerle una tinción comola de gram que nos permite hacer una diferienciación bacteriana si es positivo o negativo, tambien se puede observar las agrupaciones de las bacterias
Bibliografía:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm consultada el 11 de abril del 2012
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf consultado el 12 de abril del 2012
Métodos de esterilización, consultado el día 12 de marzo del 2012, en http://www.monografias.com/trabajos10/meste/meste.shtm
No hay comentarios:
Publicar un comentario