COPROPARASITOSCÓPICO: MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

objetivo:  saber como realizar la técnica por flotación de Willis, para poder buscar quistes y huevos que pudieran quedar en la superficie del líquido ya que en esto consiste la practica 


introducción:
esto es un método de concentración por flotación simple y consiste en prepar el material fecal con solución saturada de NaCl y es utilizado especialmente para la investigación de geohelmintos ya que los huevos de geohelmintos de especifico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lamina colocada en contacto con la superficie del liquido y este método es mas útil para el diagnostico de huevos livianos de helmintos:
* A. duodenale  
*N. americanus
*A. lumbricoides 
*H. nana


nota: pero no es recomendable para la búsqueda de huevos pesados ni larvas 


MATERIAL:

-Vaso de precipitados -  Embudo   -Gasa  -Tubo de ensayo - Portaobjetos -  Cubreobjetos -  Gradilla  - Pipeta con propipeta

-Abate lenguas


sustancias:
*Solución saturada de NaCl 
*Solución de yodo-lugol


procedimiento:
1.- Tomar aproximadamente 1 gr de heces con el abatelenguas y colocarlo en un vaso precipitado con 10 ml de solución saturada de cloruro de sodio 

2.- filtrar la mezcla con un embudo y colocándole una gasa hasta llenar el tubo de ensaye

3.- Colocarle al tubo de ensaye un cubreobjetos de manera que haga contacto con la mezcla y esperar de 5 a 10 min 

4.- los quistes de huevos flotaran y quedaran adheridos al cubreobjetos 

5.- después colocar una gota de yodo lugol  y quitar el cubreobjetos del tubo y colocarlo sobre la gota de yodo lugol en el portaobjetos 

6.- luego examinar la muestra al microscopio y observar con el objetivo 40X y buscar quistes o huevecillos de parásito

observaciones:

se encontro un quiste de Entamoeba Histolytica a las 6 aunque no se aprecia mucho en la imagen 

también se observo grasas 

conclusión:

con este método podemos hacer concentrar prácticamente todos los huevos nematodos que son los parásitos humanos mas comunes y son muy frecuentes en las regiones tropicales y subtropicales con condiciones precarias higiénicas por lo que se estima que hay 1.400 millones de infectados por Ascarasis lumbricoides, 1.200 millones por uninariasis y 1.000 millones por trichiuriasis por lo que este método es muy importante para diagnosticar estos parasitos y así poder dar un tratamiento adecuado y es mas recomendado para el diagnostico de ancylostomìdeos.

 Este metodo se basa en que los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio que tiene una densidad de 1200 y por ello permiten la flotación de los huevos y quistes mas ligeros que el medio por lo que no pueden subir parásitos mas pesados 

Referencias :

http://www.buenastareas.com/ensayos/Metodo-De-Willis/40633.html

http://usuarios.multimania.es/paraelsa/manual04/practica-6.htm

http://personal.us.es/cariza/web/para/practicas/cuadernos/analisis-coprologico-parasitario.pdf

http://www.slideshare.net/monik2010/practica-2-tecnicas-coproparasitologicas

Método de concentración por sedimentación RITCHIE

Fundamento: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia

Introducción:

 En 1917 Carles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehido, años más tarde, en 1948 Ritchie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas.

La sedimentación de parásitos intestinales en heces se logra por la centrifugación ligera o por gravedad de materia fecal logrando la recuperación de todos los protozoarios, huevos y larvas, especialmente huevos de trematodos. Aunque se inactivan las formas móviles de los protozoarios, se mantiene la integridad de los organismos. Es efectivo en heces con cantidades excesivas de grasa. Sin embargo, durante la sedimentación aparte de concentrarse los parásitos se quedan reunidos también algunos otros materiales.

Es un método de concentración fecal muy parecido al de faust, la única diferencia es que en esta técnica se sedimentara en el fondo la materia fecal al examinar y es útil para encontrar quistes, huevecillos y trofozoitos muy pesados

Material y equipo:

Centrifuga                                                                   soluc. Salina isotonica

Tubos de ensaye conicos de 15 ml                 soluc. De formaldehido al 10%

Gasa coratda en cuadros                                      éter

Embudos

Vaso precipitado de 50 ml

Aplicadores de madera

Pipetas Pasteur con bulbo

Portaobjetos

Cubreobjetos

Microscopio

Método:

1) Se coloca con la ayuda del aplicador de madera la materia fecal en el vaso de precipitado y se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza

2) después se filtra la suspensión con el embudo colocándole la gasa y se recoge el filtrado en el tubo cónico

3) luego se centrifuga la suspensión a 2000 rpm por 2 min

4) después se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces mas

5) luego al ultimo sedimento se agregan 5 ml de solución de formaldehido, se mezcla y se deja reposar durante 10 min

6) después se añaden 0.5 ml de éter, se tapan los tubos y se agitan energéticamente durante 30 segundos

7) se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm

8) después de centrifugar se observan 4 capas

- éter en la superficial

-un tapon de restos fecales

-fromaldehido

- sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios 

9) se decanta el sobrenadante y se introduce la pipeta pasteur para extaer una gota del sedimento colocándola después en el portaobjetos

                

10) se le añade una gota de yodo lugol y se cubre con un cubreobjetos

11) se observa la preparación en el microscopio con el objetivo de 10X y 40X

Observaciones:

se observaron quistes,también identificamos bacterias, jabones, fibras musculares no digeridas 

Conclusión:

El método de ritchie es muy eficaz para detectar o mas bien observar quistes y huevos, ya que tiene la ventaja de concentrar y no deformar las formas parasitarias yo creo que esto es muy cierto y es muy útil para verificar mejor los resultados obtenidos de otros métodos como es el de coproparasitoscòpico directo que no es muy seguro ya que se pude obtener falsos positivos pero e visto en internet que hay personas que no están de acuerdo en esto ya que las soluciones son muy toxicas para los seres humanos y también contaminantes para el medio ambiente y por ello han inventado otros procedimientos usando otras sustancias pero pues yo estoy de acuerdo con el método original ya que si es muy útil para dar un diagnostico de que es lo que tiene el paciente para así poder dar un tratamiento adecuado

Fuentes de información:

http://html.rincondelvago.com/ciencias-de-la-salud_2.html