sábado, 1 de octubre de 2011

Técnica de Stoll


S.E.M.S                                                                 DGETI


Centro de Bachillerato Tecnológico Industrial Y de servicios No. 199


Marisol Sebastián Rendón


Laboratorista clínico

3 “DM”

Practica: Técnica de stoll

Dr. Vicente Martínez Fragoso

Fecha de realización: 30 de septiembre del 2011

Introducción:
Esta técnica fue ideada y desarrollada por Stoll en 1923.Este método forma parte de los exámenes considerados cuantitativos, por lo que es necesario tener el antecedente de que la muestra se encuentra positiva, para su posterior cuantificación
.
La técnica es de utilidad para hacer una evaluación de la intensidad de ciertas helmintiasis, se debe recordar que los helmintos son metazoarios y dentro de esta clasificación se encuentran los nematelmintos gusanos redondos tales como;
·         Ascaris lumbricoides
·         Trichuris trichiura
·         Uncinaris( Necator Americanus y Ancylostoma duodenale)
·         Strongyloides stercoralis

Además también se pueden cuantificar platelmintos (gusanos planos) como:
·         Hymenolepis nana
·         Hymenolepis diminuta
·         Otras teniasis

Después de identificar una parasito, puede ser necesario determinar la intensidad de la infestación. Por lo general, la sintomatología de las enfermedades parasitarias se correlaciona con el número de parásitos presentes. Se conoce la eliminación diaria de huevecillos de varias especies de helmintos. Por tanto, se hace una estimación del número de parásitos al contar el numero de huevos en una cantidad conocida de heces y al calcular el numero de gusanos que requieren para producir dicho numero. Sobre los resultados tienen influencia muchas variables, como dieta, mala digestión, los ciclos de producción de huevos y la consistencia de las heces. Pero las cuentas que se realizan antes y durante el tratamiento, permiten guiarlo y las realizadas después servirán como referencia para el existo de el mismo. Los mejores resultados se logran cuando las cuentas se realizan en muestras sucesivas obtenidas en un periodo de varios días, de manera que se pueda determinar el promedio diario de liberación de huevos
 
Fundamento:
Es básicamente aritmético, los cálculos se basan en las diluciones empleadas. Debido a que la cantidad de muestra es muy pequeña  en comparación con el volumen de hidróxido de sodio, las helmintiosis moderadas son más difíciles de evaluar. Por el hecho de no utilizar tinción temporal y debido a que los quistes se aclaran con el hidróxido es una técnica específica para la cuantificación de helmintiasis






Material:                                          sustancias
v  Probeta graduada                                           - hidróxido de sodio 0.1 N
v  Palillo aplicador
v  Cuantas de vidrio
v  Microscopio
v  Tubo de ensaye cónico

Procedimiento:
1)    En el tubo de ensaye cónico se le pone 5.6 ml de hidróxido de sodio 0.1 N y con un palillo aplicador se agrega la materia fecal hasta elevar el nivel liquido a 6 ml

2)   Se añaden 5 cuantas de vidrio, se tapa con firmeza y se agita hasta formar una suspensión homogénea durante un minuto y después rápidamente se toman 0.075 ml de la suspensión y se coloca en el portaobjetos posteriormente poniéndole un cubreobjetos
3)    Con el obejtivo de 40X se cuentan los huevos de toda la preparación

4)    Se efectua dos cuentas utilizando partes separadas de alicotas de 0.075 ml de la suspensión (totla=0.15 ml) 
Cálculo:
1.- La dilución fecal original es de 1 en 15 (4ml/60ml). Como se contaron los huevos en un volumen total de 0.15 ml, el numero total de estos en 1 ml se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5x0.15x100=1)
2.- Suponiendo que el promedio de una persona rebasa los 100 g de heces por día, es posible calcular el numero d huevos por día multiplicándolo el resultado por 100 (o la cuenta de la suspensión original por 10000)
3.- para determinar el numero de parásitos hembras presentes, se divide el numero diario de huevecillos que hay en las heces entre el número promedio de
Hembra de la especie Necator: 7000 huevos/día
Hembra de la especie Ascaris: 200000 huevos/día
Hembra de la especie Trichuiris: 7500 huevos/día
4.- Se encuentra la cantidad total de parásitos al multiplicar por dos resultados encontrados en el paso tres, ya que se supone que en cualquier infestación hay un parasito macho por cada parasito hembra
5.- Algunos técnicos creen que se deben utilizar los factores de correlación de la consistencia de las heces para obtener resultados mas exactos. Para esto, se debe multiplicar el número que se obtiene en el lapso uno por el factor apropiado. Heces formadas=1, blandas formadas=1.5, blandas diarreicas=3, fluidas duarreicas=4, muy liquidas=5

Observaciones:
en esta imágenen se puede observar una fibra vegetal y un huevo esférico   
También aqui se observar un huevo semiesférico 
Conclusión:
Esta práctica es diferente a las que hemos hecho ya que ahora es cuantitativa ya que nos permite saber el número de huevos por gramo o mililitros de heces en una muestra dada, permite calcular el número de parásitos adultos presentes en el intestino dando así una cifra aproximada que permite clasificar las infecciones en ligeras, moderadas e intensas. Se basa en los principios de dilución y sapoficaciòn ya que el hidróxido de sodio al ponerse en contacto con las grasas de la materia fecal la saponifica haciendo que los huevos de los helmintos sean menos pegajosos y pues la técnica de flotación y sedimentación son poco fiables para el recuento de huevos por ello siento que este método es mas seguro, también sencillo de hacer

 Fuentes de información:










domingo, 25 de septiembre de 2011

COPROPARASITOSCÓPICO: MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR FLOTACIÓN DE WILLIS

objetivo:  saber como realizar la técnica por flotación de Willis, para poder buscar quistes y huevos que pudieran quedar en la superficie del líquido ya que en esto consiste la practica 


introducción:
esto es un método de concentración por flotación simple y consiste en prepar el material fecal con solución saturada de NaCl y es utilizado especialmente para la investigación de geohelmintos ya que los huevos de geohelmintos de especifico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lamina colocada en contacto con la superficie del liquido y este método es mas útil para el diagnostico de huevos livianos de helmintos:
* A. duodenale  
*N. americanus
*A. lumbricoides 
*H. nana


nota: pero no es recomendable para la búsqueda de huevos pesados ni larvas 


MATERIAL:

 -Vaso de precipitados
-  Embudo
  -Gasa
 -Tubo de ensayo
- Portaobjetos
-  Cubreobjetos
-  Gradilla
 - Pipeta con propipeta
-Abate lenguas


sustancias:
*Solución saturada de NaCl 
*Solución de yodo-lugol


procedimiento:
1.- Tomar aproximadamente 1 gr de heces con el abatelenguas y colocarlo en un vaso precipitado con 10 ml de solución saturada de cloruro de sodio 


2.- filtrar la mezcla con un embudo y colocándole una gasa hasta llenar el tubo de ensaye



3.- Colocarle al tubo de ensaye un cubreobjetos de manera que haga contacto con la mezcla y esperar de 5 a 10 min 
4.- los quistes de huevos flotaran y quedaran adheridos al cubreobjetos 

5.- después colocar una gota de yodo lugol  y quitar el cubreobjetos del tubo y colocarlo sobre la gota de yodo lugol en el portaobjetos 
6.- luego examinar la muestra al microscopio y observar con el objetivo 40X y buscar quistes o huevecillos de parásito
observaciones:


se encontro un quiste de Entamoeba Histolytica a las 6 aunque no se aprecia mucho en la imagen 



también se observo grasas 

conclusión:

con este método podemos hacer concentrar prácticamente todos los huevos nematodos que son los parásitos humanos mas comunes y son muy frecuentes en las regiones tropicales y subtropicales con condiciones precarias higiénicas por lo que se estima que hay 1.400 millones de infectados por Ascarasis lumbricoides, 1.200 millones por uninariasis y 1.000 millones por trichiuriasis por lo que este método es muy importante para diagnosticar estos parasitos y así poder dar un tratamiento adecuado y es mas recomendado para el diagnostico de ancylostomìdeos.

 Este metodo se basa en que los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio que tiene una densidad de 1200 y por ello permiten la flotación de los huevos y quistes mas ligeros que el medio por lo que no pueden subir parásitos mas pesados 

Referencias :


































domingo, 18 de septiembre de 2011

Método de concentración por sedimentación RITCHIE

Fundamento: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia

Introducción:
 En 1917 Carles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehido, años más tarde, en 1948 Ritchie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas.
La sedimentación de parásitos intestinales en heces se logra por la centrifugación ligera o por gravedad de materia fecal logrando la recuperación de todos los protozoarios, huevos y larvas, especialmente huevos de trematodos. Aunque se inactivan las formas móviles de los protozoarios, se mantiene la integridad de los organismos. Es efectivo en heces con cantidades excesivas de grasa. Sin embargo, durante la sedimentación aparte de concentrarse los parásitos se quedan reunidos también algunos otros materiales.
Es un método de concentración fecal muy parecido al de faust, la única diferencia es que en esta técnica se sedimentara en el fondo la materia fecal al examinar y es útil para encontrar quistes, huevecillos y trofozoitos muy pesados

Material y equipo:
Centrifuga                                                                   soluc. Salina isotonica
Tubos de ensaye conicos de 15 ml                 soluc. De formaldehido al 10%
Gasa coratda en cuadros                                      éter
Embudos
Vaso precipitado de 50 ml
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur con bulbo
Portaobjetos
Cubreobjetos
Microscopio

Método:
1) Se coloca con la ayuda del aplicador de madera la materia fecal en el vaso de precipitado y se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza


2) después se filtra la suspensión con el embudo colocándole la gasa y se recoge el filtrado en el tubo cónico

3) luego se centrifuga la suspensión a 2000 rpm por 2 min

4) después se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces mas

5) luego al ultimo sedimento se agregan 5 ml de solución de formaldehido, se mezcla y se deja reposar durante 10 min

6) después se añaden 0.5 ml de éter, se tapan los tubos y se agitan energéticamente durante 30 segundos

7) se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm

8) después de centrifugar se observan 4 capas
- éter en la superficial
-un tapon de restos fecales
-fromaldehido
- sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios 

9) se decanta el sobrenadante y se introduce la pipeta pasteur para extaer una gota del sedimento colocándola después en el portaobjetos
                
10) se le añade una gota de yodo lugol y se cubre con un cubreobjetos

11) se observa la preparación en el microscopio con el objetivo de 10X y 40X

Observaciones:
se observaron quistes,también identificamos bacterias, jabones, fibras musculares no digeridas 


Conclusión:
El método de ritchie es muy eficaz para detectar o mas bien observar quistes y huevos, ya que tiene la ventaja de concentrar y no deformar las formas parasitarias yo creo que esto es muy cierto y es muy útil para verificar mejor los resultados obtenidos de otros métodos como es el de coproparasitoscòpico directo que no es muy seguro ya que se pude obtener falsos positivos pero e visto en internet que hay personas que no están de acuerdo en esto ya que las soluciones son muy toxicas para los seres humanos y también contaminantes para el medio ambiente y por ello han inventado otros procedimientos usando otras sustancias pero pues yo estoy de acuerdo con el método original ya que si es muy útil para dar un diagnostico de que es lo que tiene el paciente para así poder dar un tratamiento adecuado

Fuentes de información: